培養制備菌落鑒定細菌分析圖像顯微鏡廠家
魚類傳染性病原菌的分離與鑒定
魚類傳染性病原主要包括病毒、細菌、霉菌三大類。不同類群的病
原菌分離鑒定的具體方法不同。因此要分離鑒定種傳染性病原菌,首先
必須判別病原菌的種類,然后根據各類微生物病原體的分離鑒定步驟進
行。本實驗主要介紹魚類細菌性病原菌的分離鑒定過程
病原體材料的采取
進行病原體分離,首先應采到含有病原體較多的材料但究競應采取
何種樣品,則要根據魚類發生的癥狀、病變區和流行傳染狀況來確定。
通常以魚的血液與病變組織為樣
血液
一般應選擇發病早期的血液為樣品。因晚期可能出現血清抗體而抑
制病原體的繁殖或破壞病原體的生存。取血樣,通常剖開魚的心臟,抽
取血液
病變組織以慮病癥狀明顯的活魚或病死后不久的魚為對象,用無菌
手術法采下一小塊病變組織,迅速放入密閉的無菌容器。
培養甚的制備
材料處理與接種分離采到的材料如是血液,即可用適宜的平板培養
基直接劃線接種,分離培養成純培養物。如果是病變組織,則先用無菌
操作將樣品搗碎,加無菌生理鹽水制成液漿,然后進行劃線分離培養。
若材料中所含的病原體很少,應先接種到適宜的增殖培養,中進行增菌
。同時留1支無接種的對照管,一起放在22C下培養至與對照管有明顯混
濁差別時為止,挑取混濁增菌液在平板培養基涂抹或劃線分離,冉培養
于22°C直至長出明顯的菌落。最后挑取可疑的單菌落分別接種于斜面
培養基,在適溫下培養至有顯著的菌替長出后,冷藏供鑒定
病原體的鑒定
血清學凝集反應
血清凝集反應試驗是鑒定病原體的重要方法之一,具體操作見第九
章。魚類病原體的鑒定一般采用玻片凝集法與試管沉淀法。
玻片凝集法在無縈載玻片一端加1滴稀釋至1:5的已知抗體免疫血清
,以無菌手術法取1滴待鑒定的病原體菌懸液加入血清中混合調勻。同
時在載玻片另端以無菌魚生理鹽水代替血清,加入同一待定的菌懸液1
滴,調勻作對照。2分鐘后,對比結果,加入血清后有凝集現象者為陽性,
反之,無凝集現象者為陰性。
試管沉淀法
在12×100毫米的試管中,分別加入稀釋成不同濃度的已知抗體免疫
血清,成一濃度梯度系列。然后加入同一濃度的,定量的待鑒定病原體
菌懸液,放入25°C水溶箱經24小時后觀察有無沉淀反應,從沉淀產生與
血清的稀釋度可知相應的凝集效價。
致病感染反應試驗選血清反應呈陽性的菌株,進行健康魚體致病感
染試驗,若能使同種健康魚感染后出現與自然狀況下病魚相同的病癥者
,方可確認為某種疾病的病原菌感染方法可以根據疾病的可能感染途徑
采用不同的方法
