細(xì)胞懸浮培養(yǎng)培養(yǎng)基觀察用微生物分析顯微鏡
組織和細(xì)胞培養(yǎng)法
組織和細(xì)胞培養(yǎng)法,可分為懸浮培養(yǎng)法、組織片固定培養(yǎng)法和單層
細(xì)胞培養(yǎng)法。
(1)懸浮培養(yǎng)法:是將組織片或者分散的細(xì)胞(用胰酶、乙二胺四乙
酸等使細(xì)胞分散成單個(gè)),以及細(xì)胞培養(yǎng)液,一起裝入玻璃容器內(nèi),密封
后培養(yǎng)的一種方法。在觀察病毒增殖時(shí),是否要把組織培養(yǎng)液按種易感
動(dòng)物?要取決于紅細(xì)胞凝集價(jià)或補(bǔ)體結(jié)合抗原價(jià)的測(cè)定、培養(yǎng)基pH的變
化和組織片的病理組織學(xué)檢查結(jié)果。這種方法已在分離病毒、組織親
和性預(yù)備試驗(yàn)、大量生產(chǎn)疫苗和血清反應(yīng)用抗原等方面應(yīng)用。
(2)組織片固定培養(yǎng)法:把小組織片放在已涂上薄薄一層雞血漿的玻
璃壁上,加入適量的雞胚浸出液,輕輕搖動(dòng),使組織片與血漿凝固,此時(shí)
組織片固定在玻璃壁上。即使加入營(yíng)養(yǎng)液,也不會(huì)使它們分離。如果將
它培養(yǎng),則在組織片周?chē)硎拘律募?xì)胞,因此可以接種病毒,觀察細(xì)胞
病變。
(3)單層細(xì)胞培養(yǎng)法:用細(xì)胞分散劑(胰酶、乙二胺四乙酸和膠原酶
等),使織分散成單個(gè)細(xì)胞。再使細(xì)胞懸浮在營(yíng)養(yǎng)液中,若靜止培養(yǎng)數(shù)天
,則細(xì)胞下沉并跗著在玻璃壁上細(xì)胞在那里開(kāi)始分裂增殖。一般,對(duì)于
正常細(xì)胞而言,增殖的新生細(xì)胞沿著玻璃面排列,由于不發(fā)生重迭分裂,
歷以不久就形成單層細(xì)胞培養(yǎng)( monolayer cell culture)單層細(xì)胞培
養(yǎng),在接種病毒后引起的變化容易看到,而且由于病毒和細(xì)胞的量的組
合也正確,所以能非常精確的作許多試驗(yàn)。感染病毒的細(xì)胞一旦進(jìn)入培
養(yǎng)液,則新生的病毒就不斷地釋放到細(xì)胞外面,結(jié)果所有細(xì)胞都感染。
這時(shí),如果讓適當(dāng)稀釋過(guò)的病毒容液在單層細(xì)胞上面流過(guò),待細(xì)胞吸著
病毒以后,再洗細(xì)胞,并加上一層含背養(yǎng)液的瓊脂,那么在感染細(xì)胞中形
成的新病毒,因有瓊脂所隔而不能擴(kuò)散到遠(yuǎn)離的細(xì)胞,只使鄰近部的細(xì)
跑感染,并形成肉眼可見(jiàn)的、散在性的、圓形的細(xì)胞病灶,即蝕斑( pla
que)。
